Towards a defined ECM and small molecule basedmonolayer culture system for the expansion of mouse and human intestinal stemcells浙江大学医学院附属第二医院骨科沈炜亮

编辑有话说：

在这篇文章中，作者使用了一种类似于三明治这样的结构，用于促进肠道干细胞的扩增。

研究背景：

当前有关肠道干细胞的培养方式面临了很多的挑战，比如支持细胞扩增的基质是动物来源的或者成分不明的物质，不同批次的培养基存在着一定的差异，这些都或多或少阻碍了肠道干细胞的研究有效地进展，大大延缓了肠道干细胞治疗走上临床的进程。

研究方法：

（1）作者先通过筛选一些主要的细胞外基质的成分以及它们不同的浓度，对细胞粘附的作用，确定出比较合适的可用于肠道干细胞扩增的细胞外基质

（2）在确定了细胞外基质之后，为了使扩增的细胞更好地维持Lgr5+，在原先的基础上，覆盖了一层1型胶原，观察Lgr5+维持的效果。

（3）诱导扩增后的肠道干细胞，观察是否具有多向分化的潜能

（4）比较本文创造的培养方式和常规的3D培养之间的差异

（5）筛选并确定可进一步促进干细胞扩增的小分子药物

研究结果：

（1）在不同细胞外基质的不同浓度的coating培养下，最终确定了4型胶原用100mg/ml的浓度促进细胞粘附的作用最强，并发现这个作用与integrin-α2β1的作用有关。

（2）在4型胶原coating培养的基础上，再在培养的细胞上覆盖一层1型胶原，构建起一种类似三明治一样的培养结构，可促进细胞Lgr5+的维持。

（3）在三明治样培养结构中扩增的干细胞，具有多向分化的能力。与一般的3D培养相比有类似的Ki67+阳性率，但是Lgr5+阳性的细胞要略低。而Alpi的表达在三明治样培养结构中要更高，这可能意味这些细胞有更强的干性。

（4）确定了LDN-193189这种小分子药物可进一步促进细胞的扩增

研究结论：

这篇文章构建了一个新的干细胞培养方式，即三明治一样的结构，也就是在细胞培养时，底层coating上4型胶原，种植上细胞后，上面再覆盖一层1型胶原。研究发现，这种培养方式可有效扩增肠道干细胞，并维持Lgr5+的表型。在这种新的结构中扩增的干细胞，能够保持其多向分化的能力。再加上LDN-193189这种小分子药物可进一步促进干细胞的扩增。

二次整理者：阮登峰/沈炜亮

浙江大学医学院附属第二医院·骨科；

浙江大学骨科研究所；

浙江大学李达三·叶耀珍再生医学发展基金；

浙江省组织工程与再生医学技术重点实验室；

中国医师协会骨科医师分会再生医学工作组；

本人专业诊治范围：

1，肌腱病&肌腱/韧带损伤：肘-网球肘；肩-肩周炎，肩袖损伤；膝-弹跳膝，跑步者膝，前交叉韧带损伤；踝-跟腱炎，跟腱断裂；手腕部-腱鞘炎；筋膜炎

2，再生医学技术治疗运动系统疑难杂症，包括：软骨/半月板/肌腱/韧带的修复、重建和再生；

门诊类型：肌腱病专科门诊！关节外科/运动医学专家门诊；

致谢：感谢 唐陈琪 浙大李氏基金和再生医学中心 的分享！